你在做光纖記錄實驗陶瓷插針埋植手術，你是不是也遇到過：

埋植光纖的手術操作難度較大，一不小心又得重做；

無法找到最佳的光纖位點；

操作不當很容易損害周邊血管、神經、脂肪組織；

埋植位置不精準。

本文從材料和試劑、設備和實驗過程三個方面，為大家梳理光纖記錄實驗光纖埋植手術操作，助力各位實驗技能的提升！

一、材料和試劑

濾紙、多模光纖、陶瓷插芯、注射套管、1ml 注射器、鋁箔、陶瓷套管、套管防塵帽、封口膜、棉簽、C57BL / 6 小鼠、AVV 病毒（儲存在-80°C直至使用滴度為 1011至 1013pfu/ml）、牙科水泥、環氧樹脂、縫合套件、淚凝膠、碘伏、鹽水、70％乙醇、過氧化氫、冰、鎮痛藥

二、設備

切割器、光纖剝離工具、10μL 移液器、數字卡尺、腦立體定位儀、異氟烷麻醉系統、體溫維持儀、加熱墊、手術工具（包括剪刀，鑷子，手術刀）、顱鉆、鉆頭、注射泵、微量注射器、光纖、高壓滅菌器

三、實驗過程

1. 光纖插芯制作

1) 使用光纖剝離工具剝離多模光纖。

2)使用切割器對剝離的多模光纖片段進行切割。

3) 將光纖插入陶瓷插芯。

4)使用環氧樹脂將光纖固定到陶瓷插芯上，磨平凸起的插芯末端。

5)切割另一端至合適的長度，該長度使用數字卡鉗測量的適當目標長度，例如， 長度= 6.4 mm（陶瓷插芯）+ 0.5 mm（插芯和顱骨之間的間隙）+參考腦圖確 定所需的目標深度。

6)檢測打磨后的光纖：首先把光纖插芯插入套管，不合格的插芯在末端的光斑。

7)比較小（沒磨平，接觸不良，耗散大），合格的插芯會有一個圓形集中的光 斑。

8) 光纖干燥過夜。

9) 植入前對光纖高壓滅菌。

10)確認每個光纖的透射率，每個光纖的激光透射率必須> 75％。

2. 動物準備

1) 小鼠稱重。

2) 在異氟烷誘導盒中麻醉小鼠（4％，1 L / min）。

3) 將小鼠嘴部放在麻醉面罩中。

4) 給予止痛藥（例如Dolorex 10 mg / ml，在鹽水中按1:20 稀釋，每25g 動物 使用0.1ml）麻醉后皮下注射。

5) 剃掉從眼睛到耳朵后面的毛發。

6)將小鼠放在加熱墊上，并用適配器固定在腦立體定位儀上，并將異氟烷調整為0.5-1％。

7)麻醉可通過對腳趾捏合無反應（監測腳趾捏合反應）來確認，手術期間每20分鐘一次。

8)用棉簽蘸少量碘伏清潔頭部。

9) 在頭皮表面下注入0.1 ml 利多卡因，以提供局部鎮痛作用。

10)保護眼睛避光：涂上眼藥膏并蓋好。

3. 切口和開顱手術

1) 從前到后（眼睛之間到顱骨后部）做切口。

2) 用蘸有鹽水的棉簽擦拭切口。

3) 將小鼠門齒扣在適配器的齒棒上，套好 麻醉面罩，耳桿插入小鼠耳蝸（保證兩 側耳桿刻度一致）。

4) 找到并標記Bregma（前囟點）位置。

5）確保頭骨干凈（沒有血液，毛皮或組 織）并且干燥（使用干燥的棉簽吸收蒸 餾水或血液）。

6）將注射泵夾持到定位儀上，用熱熔膠將 玻璃電極焊接到微量注射器上并安裝到微量注射泵上。

7）將該點設定為原點，而后測量Bregma 點左右兩側旁開2.3mm 處顱骨的高度 差，小于 0.03mm 則認為左右顱骨水平，大于0.03mm 則需要調節耳桿的高度來 調整水平，前后方向測量 Bregma 點和Lambda 點的高度差， 也需小 0.03mm， 若大于 0.03mm 則上下調整鼻夾的高度（注意：移動顱骨后需要重新定Bregma 點）。

8）腦圖譜中查詢目標腦區的坐標。

9）標記目標位置。

10）在目標標記點處用顱鉆進行開顱。如果發生出血，請使用棉簽清潔血液，然 后使用一塊可吸收的海綿來止血。

11）用鹽水浸濕的海綿覆蓋開顱部位。

4.病毒注射

1) 從冰箱中取出病毒。

2) 設置注射泵參數（例如吸取體積300nL，速度為800nL/min，模式調為吸入Withdraw）吸取病毒，使其尖端接觸Bregma 點并設定原點。

3) 取走開顱部位濕海綿。

4)將微量注射針移動至目標位點上方，然后下針至目標位點（下針過程保持勻速 緩慢），設置注射泵參數（體積 300nL，速度30nL/min，模式調為泵出Infuse）,開始注射病毒。

5) 注射完成后靜置10min，10min后將微量注射器抬起。

6) 用鹽水浸濕的海綿覆蓋開顱手術部位。

5、光纖埋置

1)在病毒注射后，從腦立體定位儀上取下注射泵。

2) 根據目標位點坐標的AP/ML，用顱鉆在顱骨上打孔。

3)將光纖插針用夾持器固定到腦立體定位儀上。

4) 固定光纖之后需要用光纖尖部接觸Bregma 點，重新移動至目標位點上方（光 纖應位于鉆頭產生的窗口上方）。

5) 將光纖下降到適當的DV 坐標。

6)用牙科水泥固定光纖（注意：牙科水泥輕輕涂抹在光纖纖維的底部周圍）。

7) 縫合皮膚和清潔手術部位。注入適當的鎮痛藥并將小鼠放在單獨的加熱墊上 1小時。在將其放到新籠子之前，確保小鼠完全蘇醒，小鼠在手術后單獨飼養，術后監測健康情況。

成功埋植后，還需進行信號檢測

高敏感的信號檢測技術手段

有助于獲取高質量的熒光數據

助力實驗數據準確性的提升

兩種技術聯用

兼容光遺傳功能的光纖記錄系統

瑞沃德R821三色多通道光纖記錄系統（可兼容光遺傳），通過一根光纖即可實現同一位點記錄和刺激。無需復雜的實驗操作，只需植入一根陶瓷插針即可完成兩種技術的聯用。

優點：

避免多根插針植入導致坐標誤差，實驗結果更為精準；

光路統一，避免信號串擾；

減少線路連接，輕松提高實驗效率。